Viral Vektör Laboratuvarı, klinik öncesi aşı çalışmaları ve diğer araştırma amaçları için gerekli olan rekombinant viral vektörlerin üretildiği bir alandır. Rekombinant viral vektörlerin kullanımı ve geliştirilmesinde karşılaşılan önemli zorluklardan biri, bu vektörlerin yeterli verim ve kalitede üretilebilmesidir. Bu doğrultuda, düşük maliyetli ve yüksek kaliteli viral vektörlerin üretimine odaklanılmaktadır.
Rekombinant viral vektör üretim süreci, öncelikle hedef geni içeren bir plazmitin moleküler biyolojik teknikler kullanılarak oluşturulmasıyla başlar. Ardından, transfeksiyon işlemi uygulanarak hedef proteini üretebilecek viral vektör elde edilir. Elde edilen viral vektör, seri pasajlar halinde çoğaltılır ve identifikasyon ile potens gibi testler başarıyla tamamlandığında virüs stokları oluşturulur. Standart bir üretim süreci sonucunda, Ad5-CMV vektörleri kullanılarak uygun titrede saflaştırılmış adenoviral vektörler elde edilmektedir. Üretilen viral vektörler, kalite ve güvenilirlik açısından aşağıda belirtilen kalite kontrol testlerine tabi tutulmaktadır:
İdentifikasyon ve Genetik Stabilite:
Bunun için hedef proteinin ekspresyonu immunofloreasns analiziyle tespit edilirken, genetik stabilitenin doğrulanması ise tüm genom sekanslama yöntemi kullanılır.
Potens:
İnfektöz viral titre ise immünotitrasyon kiti ile gerçekleştirilir. Toplam viral partikül ölçümü spektrofotometre ve kantitatif PCR (qPCR) ile gerçekleştirilir.
RCA Analizi:
Vahşi Adenovirüs tip 5’in pozitif kontrol olarak kullanıldığı analizde üretilen adenoviral vektörlerin replikasyon kompetent virüs analizi A549 hücreleriyle gerçekleştirilir. Bu test sayesinde üretilen adenoviral vektörün replikasyon kompetent olmadığı gösterilir.
